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超凈工作臺(tái)在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用

超凈工作臺(tái)在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用

時(shí)間:2021-4-15 編輯:傳遞窗工程師

超凈工作臺(tái)在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用:
植物組織具有無(wú)限增殖和產(chǎn)生不定芽、不定根的能力。在培養(yǎng)條件適宜時(shí),只要通過(guò)一個(gè)超凈工作臺(tái),以及用一個(gè)芽可以培養(yǎng)出許多植株來(lái)。其在保持優(yōu)良砧木及品種種性、進(jìn)行工廠化育苗方面具有很好的意義。

超凈工作臺(tái)在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用

超凈工作臺(tái)在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用方法步驟如下:
一、外植體接種與材料消毒
取田間當(dāng)年生新梢或一年生枝蔓,去葉,用肥皂水將表面刷洗,并用自來(lái)水沖洗干凈,剪成一芽一段,放入干凈燒杯,拿進(jìn)超凈工作臺(tái);先用70%酒精過(guò)一下,無(wú)菌水(用高壓鍋,在120℃下,滅菌30分鐘的水)沖洗3遍;再用0.1%升汞液消毒5~10分鐘,無(wú)菌水沖洗3遍;然后用酒精燈火焰消毒過(guò)的工具(鑷子、剪刀、撥針、解剖刀等)剝?nèi)[片、葉柄,取出帶數(shù)個(gè)葉原基的幼芽接入培養(yǎng)基,半包埋。培養(yǎng)基配好后裝入廣口的罐頭瓶、三角瓶或試管,裝入量為1~2厘米高。120℃滅菌30分鐘后備用。

超凈工作臺(tái)在當(dāng)今醫(yī)學(xué)、生物科學(xué)、食品科學(xué)和電子科學(xué)等研究領(lǐng)域中已經(jīng)成為一種必不可少的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備。科學(xué)家們需要超凈工作臺(tái)來(lái)提供一個(gè)潔凈的,無(wú)塵的試驗(yàn)環(huán)境,來(lái)保護(hù)昂貴的樣本不會(huì)受到污染,以及危險(xiǎn)的樣品不泄露到周?chē)h(huán)境中。超凈工作臺(tái)正是為了滿足用戶這方面的要求而出現(xiàn)的。

外植體接種后放到培養(yǎng)室的培養(yǎng)架上培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:光照1000勒克斯,8~10個(gè)小時(shí),暗14~16小時(shí);溫度25~28℃。培養(yǎng)1~2周,即可看出是否消毒徹底,有無(wú)感染。及時(shí)檢查,將未感染的外植體轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),丟棄已感染的外植體。

二、繼代繁殖
接入的外植體培養(yǎng)1~2個(gè)月,即可長(zhǎng)到2~3厘米長(zhǎng)。在超凈工作臺(tái)上,將其剪成約1厘米長(zhǎng)莖段,接種到新的培養(yǎng)基中(培養(yǎng)基的配方同上)。剪莖段時(shí)所用工具和培養(yǎng)皿(或牛皮紙)都要經(jīng)過(guò)消毒,消毒方法分別同上述酒精燈消毒法和高壓消毒法。

其后,大約每25天左右進(jìn)行一次繼代培養(yǎng)。每次的莖段增殖量約為3~4倍。反復(fù)進(jìn)行,直到所需數(shù)量。
三、生根
以上培養(yǎng)的莖段長(zhǎng)到2厘米以上時(shí),即可用于生根。生根培養(yǎng)基的成分為培養(yǎng)基的大量元素減半,除激素和蔗糖外,其他成分不變。
生根培養(yǎng)基配好后也需高壓滅菌(120℃,30分鐘)后使用。

生根培養(yǎng)20天左右,莖段上即可長(zhǎng)出根,成為完整苗。生根苗長(zhǎng)到3~5厘米長(zhǎng)時(shí)即可鍛煉、移栽。

四、生根苗的鍛煉、移栽
(一)鍛煉
組培苗在人工培養(yǎng)條件下長(zhǎng)期生長(zhǎng),對(duì)自然生長(zhǎng)環(huán)境的適應(yīng)性減弱。移栽前需要一個(gè)過(guò)渡階段,即鍛煉。鍛煉方法為:將培養(yǎng)瓶移至自然光照下2~3天,打開(kāi)瓶口2~3天,再移栽。
(二)移栽:
移栽時(shí)先洗凈根上培養(yǎng)基,避免培養(yǎng)基感染雜菌致苗死亡。移栽方法及灌水、遮陽(yáng)等管理同實(shí)生苗移栽。但注意組培苗比較嬌嫩,需輕盈操作。

五、工廠化育苗:
將以上培養(yǎng)基制備及超凈工作臺(tái)相關(guān)、裝瓶、消毒、無(wú)菌苗增殖、生根、鍛煉、移栽等過(guò)程全部放在實(shí)驗(yàn)室和溫室中進(jìn)行,即為工廠化育苗。目前,這樣的生產(chǎn)線已在意大利和法國(guó)投入使用。但外植體接種尚需人工操作。

超凈工作臺(tái)的工作原理:
超凈工作臺(tái)由三個(gè)基本的部分組成:高效空氣過(guò)濾器,風(fēng)機(jī),箱體,僅僅以上三部分,就可以構(gòu)成一個(gè)超凈工作臺(tái),當(dāng)然,這樣的產(chǎn)品不會(huì)有人購(gòu)買(mǎi),所以制造商會(huì)給它裝上很多輔助系統(tǒng),有些很有用,有些很無(wú)聊。

超凈工作臺(tái)分為兩種,一種是垂直流超凈工作臺(tái),即工作區(qū)域的空氣流動(dòng)方向是垂直的,另一種是水平流,即空氣是水平流過(guò)工作區(qū)域的。一般多見(jiàn)的是垂直流超凈工作臺(tái),所以本文主要介紹垂直流超凈工作臺(tái)。

對(duì)超凈工作臺(tái)而言,主要的就是空氣循環(huán)過(guò)濾的過(guò)程,這就是一切超凈工作臺(tái)為達(dá)到潔凈目的采取的基本手段,在這個(gè)過(guò)程中,風(fēng)機(jī)起到了心臟的作用:它泵浦箱體內(nèi)的空氣,使它不段的循環(huán),更新;箱體就象人的身體,它的氣密性使外界渾濁的空氣無(wú)法侵入,并且為空氣循環(huán)提供了風(fēng)道;

高效過(guò)濾器捕捉空氣中塵埃,使通過(guò)它的空氣潔凈。這里,需要注意的是超凈工作臺(tái)里不是處處是潔凈的,過(guò)濾器和空氣循環(huán)模式只能保證空氣離開(kāi)過(guò)濾器出風(fēng)口后在部分空間內(nèi)是純凈的,一般這個(gè)空間被稱為工作區(qū)域,只有在這個(gè)區(qū)域操作,才是安全的。而最臟的,不用說(shuō),就是過(guò)濾器本身了。開(kāi)環(huán)空氣循環(huán)模式主要特征是在每次循環(huán)中所有空氣從外界采入并最終都回到環(huán)境中去,一般水平流的凈化臺(tái)都采用開(kāi)環(huán)模式。

這種模式的超凈工作臺(tái)結(jié)構(gòu)較簡(jiǎn)單,成本低廉,但是風(fēng)機(jī)和過(guò)濾器的負(fù)載較大,對(duì)其壽命會(huì)產(chǎn)生不良影響。同時(shí)完全開(kāi)環(huán)的空氣循環(huán)的潔凈效率不高,且外排的空氣可能會(huì)攜帶部分樣本中的細(xì)菌等,可能會(huì)對(duì)環(huán)境造成危害。通常只用于潔凈要求較低的或是無(wú)生物危害的場(chǎng)合。

可見(jiàn),閉環(huán)模式其實(shí)也不是完全封閉的氣流循環(huán),每次循環(huán)中將有的空氣排放到環(huán)境空間,但這些外排的氣體已經(jīng)過(guò)一個(gè)外排高效空氣過(guò)濾器的過(guò)濾。的氣體流過(guò)工作區(qū)域后經(jīng)導(dǎo)流孔重新進(jìn)入下一個(gè)循環(huán)過(guò)程,較外界吸入的空氣而言,這些氣體還是比較純凈的,這樣過(guò)濾器的負(fù)載就較小,壽命也會(huì)較長(zhǎng)。這種空氣循環(huán)模式為目前主流產(chǎn)品所采用。

對(duì)于這個(gè)問(wèn)題,人人都有自己的見(jiàn)解,這里只是闡述本人的一些建議,供諸位參考。
無(wú)論銷(xiāo)售人員在你面前如何炫耀各種新奇的技術(shù),你一定要注意這種超凈工作臺(tái)使用的風(fēng)機(jī)和高效過(guò)濾器,這兩樣?xùn)|西代表了產(chǎn)品的技術(shù)水平,是無(wú)法作偽的。

很遺憾,風(fēng)機(jī)和高效空氣過(guò)濾器國(guó)內(nèi)的水平比國(guó)外產(chǎn)品差了很多,所以國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的高檔產(chǎn)品一般采用的是進(jìn)口的過(guò)濾器和風(fēng)機(jī)很多人會(huì)對(duì)你說(shuō)“我們采用的是高效空氣過(guò)濾器”,因?yàn)楦鲊?guó)對(duì)高效空氣過(guò)濾器定義和標(biāo)準(zhǔn)是不同的,甚至測(cè)試方法也有較大差異,所以最好不要把高效空氣過(guò)濾器這個(gè)概念和過(guò)濾器真正的過(guò)濾效率等同起來(lái)。

可以要求供應(yīng)商提供類(lèi)似對(duì)微米顆粒過(guò)濾效率大于的過(guò)濾器的過(guò)濾效率數(shù)據(jù),顆粒越小,過(guò)濾捕捉效率越高,則該過(guò)濾器性能越好,值得注意的是國(guó)際上一般采用的測(cè)試方法是光子計(jì)數(shù)法,而國(guó)內(nèi)通用的測(cè)試方法是鈉焰法。
當(dāng)然隨著國(guó)內(nèi)工業(yè)水平的快速提高,現(xiàn)在國(guó)產(chǎn)的超凈工作臺(tái)已經(jīng)不會(huì)比進(jìn)口的差多少了,對(duì)于一般的百級(jí)潔凈區(qū)要求的話,國(guó)產(chǎn)的超凈工作臺(tái)已經(jīng)綽綽有余了。

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